Физиолого-биохимические основы применения микроклонального способа размножения голубики высокорослой (Vaccinium corymbosum L)

193.1. Молекулярно-генетическая сертификация объектов исследованийля подтверждения сортосоответствия опытных таксонов голубики, по-лученных микроклональным и традиционным способами вегетативного раз-множения, перечень которых приведен в табл. 3.1.1, была проведена их моле-кулярно-генетическая сертификация на основе мультилокусного маркирова-ния тотальной НК [50].аа Перечень исследуемых генотипов V. corymbosum №егендаТаксон1Atlantic vvСорт Atlantic, полученный традиционным черенкованием (in vivo)2Atlantic vtСорт Atlantic, полученный методом in vitro3Concord vvСорт Concord, полученный традиционным черенкованием (in vivo)4Concord vtСорт Concord, полученный методом in vitro5luecrop vvСорт luecrop, полученный традиционным черенкованием (in vivo)6luecrop vtСорт luecrop, полученный методом in vitro7Elizabeth vvСорт Elizabeth, полученный традиционным черенкованием (in vivo)8Elizabeth vtСорт Elizabeth, полученный методом in vitro9Weymouth vvСорт Weymouth, полученный традиционным черенкованием (in vivo)10Weymouth vtСорт Weymouth, полученный методом in vitroПрепараты тотальной НК из исследуемых образцов получали методом CTAB – экстракции [165] в собственной модификации. Обезвоженную в силика- геле листовую ткань предварительно гомогенизировали на приборе Tissue Lyser II ( IAGEN). альнейшее выделение НК осуществляли в соответствии со сле-дующим Протоколом: к 0,05 г высушенной гомогенизированной растительной ткани добавляли 600 мкл экстрагирующего буфера [100mM Tris-HCl, 1.4M NaCl, 20mM EDTA, 2 % (w/v) CTAB, 1 % (w/v) PVP [mol wt 360 000], 0,4 % (v/v) -меркаптоэтанол pH 8,0] и в течение 60 мин нагревали до 60 С, периоди-чески встряхивая. обавляли 600 мкл реактива Sevag [24 хлороформ: 1 изо- амиловый спирт] с последующим встряхиванием пробирок в течение 10 мин. Затем проводили разделение фаз центрифугированием в течение 15 мин (15 000×g, 25 С). Водную фазу ( 500 мкл) переносили в стерильную про-бирку об емом 2,0 мл и добавляли эквивалентный об ем ...